＜DNA粗萃取＞

一、       實驗目的：
從實驗中了解DNA粗萃取的基本原理，以及學習簡單萃取生物DNA的基本技巧。

二、       實驗原理：
因為DNA在食鹽水溶液中的溶解度會隨著濃度的變化而改變，當食鹽水濃度為0.14M時，DNA不溶於酒精，但是細胞中的某些物質(例如:細胞膜、蛋白質等)則可以溶於酒精溶液。利用此原理，可以將DNA與其他非DNA的物質分離，而更進一步純化出含雜質較少的DNA。

三、       實驗材料：
1.生物細胞(唾液、水果或其他生物組織…)
2.嫩精(或其他含有蛋白酶的物質，ex.鳳梨汁)
3.清潔劑(含有sodium lauryl sulfate，大部分清潔劑都有)
4.濃食鹽水(5M) ※如何調配？
5.冰酒精(95%)、酒精(70%) ※如何以95%酒精調配出70%酒精？
6.紗布                          7.燒杯                         
8.攪拌棒                        9.量筒                         
10.滴管

四、       實驗步驟：
(一)人體DNA萃取
<步驟1> 調配緩衝液：
         取100ml的食鹽水(5M)加入一些清潔劑和嫩精。
<步驟2> 取下口腔皮膜細胞：
         取10ml的水漱口1～2分鐘，吐在燒杯裡。
<步驟3> 純化DNA：
         將潄口水加入20ml的緩衝液，輕輕攪拌2分鐘。
<步驟4> 析出DNA：
         用滴管吸取95%的冰酒精從杯壁慢慢加入杯中（不要攪拌），酒精會浮在上層，
         此時，在兩層的交界處會出現如棉絮般的白色物質，即為DNA。
<步驟5> 取出DNA：
         以玻棒將DNA捲起，或滴管將DNA吸起，放入70%的酒精中保存。

(二)水果DNA萃取
<步驟1> 製備果汁：
         將去皮水果放入果汁機打碎，放入燒杯中再加入100ml的水。
<步驟2> 溶解染色體：
         加入2.5ml的清潔劑，攪拌均勻約3分鐘。
<步驟3> 純化DNA：
         (1)加入5ml的5M濃食鹽水，並攪拌5分鐘。
         (2)加入嫰精水溶液5ml，持續攪拌至少5分鐘。
               ※切記，攪拌過程不可太快，攪拌的方向也不要改變，否則容易破壞DNA的結構，如此就不容易蒐集
                 到較長的DNA了。
<步驟4> 收集DNA濾液：
         燒杯中的混合液以雙層紗布過濾，收集濾液(約15ml)。
<步驟5> 析出DNA：
         用滴管吸取95%的冰酒精從杯壁慢慢加入杯中（不要攪拌），酒精會浮在上層，
         此時，在兩層的交界處會出現如棉絮般的白色物質，即為DNA。
<步驟6> 取出DNA：
         以玻棒將DNA捲起，或滴管將DNA吸起，放入70%的酒精中保存。

五、       問題討論：
1. 加入洗碗精的目的是為了溶解磷脂質，也就是細胞膜和各胞器的成分。 
2. 加入濃食鹽水是為了溶解DNA，可中和帶負電的DNA；DNA在0.14M的食鹽水溶解度最低，食鹽水濃度
    愈高DNA溶解度愈好。 
3. 加入鳳梨汁是為了分解與DNA纏繞在一起的蛋白質，因為鳳梨汁中含有蛋白質分解酶。 
4. 加入95%冰酒精是為了純化DNA，因為DNA不溶於酒精，但細胞中其他成分會。 
5. 雲狀物的DNA是很多條DNA纏繞在一起。DNA寬度約22到24埃，而人類眼睛無法辨別。 
6. 唾液析出的DNA不一定都是口腔皮膜細胞的DNA，也許有口腔中細菌的遺傳物質。 
7. 唾液中所萃取出來的DNA很少，可能是因為漱口時漱得不夠用力，並沒有使足夠的口腔皮膜細胞脫離至清
    水中。